Концентрация белка, связывающего жирные кислоты, как новый показатель фертильности эякулята

Прогноз наступления беременности при лечении бесплодия в супружеской паре методом экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) [1–5], наличие или отсутствие патологии при развитии плода напрямую зависит от показателей здоровья женщины и качества спермы партнера [6][7]. Если в отношении участвующих в экстракорпоральном оплодотворении (ЭКО) женщин проводятся отдельные исследования по прогнозированию исходов [3][4], то в отношении мужчин встречаются лишь единичные работы по данной проблеме [2][5][8].

Одним из компонентов семенной плазмы (СП), изменение концентрации которого косвенно может указывать на нарушение сперматогенеза, является белок, связывающий жирные кислоты (БСЖК) [9–13]. Данный протеин определяется в крови, ликворе, моче, эякуляте [9–11][13]. Представляется интересным рассмотреть показатель концентрации БСЖК в качестве критерия выявления инфертильности спермы, в том числе для определения результативности ЭКО.

Цель исследования – определение маркерной функции показателя концентрации БСЖК в семенной плазме для оценки фертильности эякулята, используемого при лечении бесплодия в супружеских парах с применением ВРТ.

Материалы и методы исследования

В исследование были включены 96 мужчин возраста 32,1 ± 7,8 года, проходивших обследование с целью уточнения причины бесплодного брака. Исследование выполнено с соблюдением этических принципов проведения медицинских исследований с участием людей в качестве субъектов, изложенных в Хельсинкской декларации ВОЗ, и было одобрено этическим комитетом ФГБОУ ВО «Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера» Минздрава России.

Эякулят оценивали в соответствии с рекомендациями ВОЗ [6]. СП отделяли центрифугированием образцов при 3000 об/мин. Концентрацию БСЖК в СП определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-системы «Белок, связывающий жирные кислоты, – ИФА – БЕСТ» (А-9102; ООО «Вектор-Бест», Россия).

В основную группу (n = 63) вошли мужчины из супружеских пар, которые проходили лечение по поводу бесплодия с применением ЭКО: их сперма характеризовалась уменьшением концентрации сперматозоидов и/или их общего содержания [6]. Группа сравнения (n = 33) была представлена обследованными с нормальными показателями концентрации и общего содержания сперматозоидов в эякуляте [6] (табл. 1).

Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета программ Statistica v. 7. Для сравнения двух независимых выборок использовали U-критерий Манна – Уитни. Количественную оценку линейной связи между двумя случайными величинами определяли с использованием коэффициента ранговой корреляции (R) Спирмена.

У мужчин основной группы для определения информативности использования концентрации БСЖК в СП в качестве критерия фертильности эякулята выявляли предсказательную ценность положительного и отрицательного результатов ЭКО путем вычисления диагностической чувствительности (ДЧ), диагностической специфичности (ДС) и диагностической эффективности (ДЭ) [14].

Для прогнозирования инфертильности эякулята было выбрано следующее значение точки разделения: при значении концентрации БСЖК от 0 до 0,95 нг/мл прогнозировали инфертильность эякулята, то есть возможный неблагоприятный исход ЭКО, при значении более 0,95 нг/мл эякулят рассматривали как фертильный, прогнозируя благоприятный исход ЭКО. Если после проведенного лечения у партнерши наступила беременность, а перед проведением ЭКО у партнера регистрировался уровень БСЖК выше указанного значения, результат оценивался как истинно положительный (ИП) [14]; если при исходе лечения с применением ВРТ, также закончившимся беременностью, концентрация БСЖК в эякуляте мужчины была ниже 0,95 нг/мл, результат оценивался как ложноположительный (ЛП).

Результаты тестов ниже значения концентрации БСЖК 0,95 нг/мл в СП эякулята в группе мужчин, у партнерши которых после ЭКО беременность не наступила, оценивали как истинно отрицательные (ИО). Результаты тестов ниже указанного уровня БСЖК в группе мужчин, у партнерши которых после ЭКО беременность наступила, оценивали как ложноотрицательные (ЛО) [14]. Диагностическую чувствительность (ДЧ) рассчитывали как отношение количества мужчин, концентрация БСЖК в эякуляте у которых была больше 0,95 нг/мл и после ЭКО была зарегистрирована беременность у партнерши, к общему числу мужчин, у партнерш которых наступила беременность после лечения – ДЧ = ИП/(ИП + ЛО) [14]. Диагностическую специфичность (ДС) – как отношение количества мужчин, концентрация БСЖК в эякуляте у которых была менее 0,95 нг/мл и факт беременности у партнерши в паре не был зарегистрирован после ЭКО, к общему числу мужчин, у партнерш которых наступила беременность после лечения: ДС = ИО/(ИО + ЛП). Диагностическую эффективность (ДЭ) как отношение правдоподобия положительного и отрицательного результатов рассчитывали как отношение количества мужчин, содержание БСЖК в эякуляте которых было больше 0,95 нг/мл больных, к общему количеству мужчин, включенных в исследование: ДЭ = ИО + ИП/(ИО + ИП + ЛП + ЛО) [14].

Результаты исследования

Среднее содержание БСЖК в СП составило 1,29 ± 0,24 нг/мл, медиана и интерквартильный диапазон 1,23 [ 1,13–1,35] нг/мл, варьировало от 1,03 до 2,79 нг/мл (табл. 2).

Установлены статистически значимые различия между группами (p = 0,000016) (табл. 2). Содержание БСЖК в СП не коррелировало с объемом эякулята (R = 0,158855), отмечена слабая корреляционная взаимосвязь уровня БСЖК с концентрацией сперматозоидов (R = 0,578008) и их количеством в эякуляте (R = 0,583599).

При определении информативности показателя концентрации БСЖК в СП в качестве критерия фертильности эякулята для мужчин основной группы определяли количество ИП, ИО, ЛП и ЛО [14] исходов ЭКО (табл. 3).

Наибольшее число было представлено ИП результатами (57,14%), остальные по численности были меньше и составили 23,80% ИО, 12,69% ЛО и 6,35% ЛП.

Обсуждение полученных данных

По нашему предположению, высказанному ранее [10], одним из способов продвижения молекул БСЖК в эякулят является их секреция добавочными половыми железами мужчины, поэтому более высокая концентрация данного белка в сперме у лиц с высоким содержанием сперматозоидов обусловлена большей интенсивностью сперматогенеза. Уменьшенное содержание БСЖК в эякуляте пациентов основной группы, возможно, связано с низкой скоростью продукции сперматозоидов и может расцениваться как неблагоприятный фактор [10]. Кроме этого, молекулы указанного протеина могут попадать в сперму из кровеносного русла по градиенту концентрации.

Достаточно высокие показатели ДЧ (81,82%), ДС (78,95%), ДЭ (80,95%) тестов, характеризующих исходы ЭКО, по нашему мнению, позволяют использовать показатель концентрации БСЖК в СП для косвенной оценки качества сперматозоидов в эякуляте (патент № 2776977) [15]. Внедрение в практику указанного критерия определения качества сперматозоидов может улучшить результат лечения бесплодия в супружеской паре с применением ЭКО [10][15].

Заключение

Таким образом, БСЖК в СП может выступать в роли маркера нарушений сперматогенеза. Исследование данного протеина в эякуляте повышает достоверность выявления мужского фактора бесплодия на доклинических стадиях, что может иметь практическое значение – обеспечить точность прогнозирования исходов ЭКО.

Конфликт интересов: авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Источник финансирования: авторы заявляют о финансировании проведенного исследования из собственных средств.